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在等位基因特异PCR中,Mg2+、dNTP及taq DNA聚合酶的用量均大于普通PCR。
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【方法】对模板DNA、引物、dNTP mixture、taq DNA聚合酶浓度及退火温度设置不同梯度,研究各因素对PCR结果的影响;
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为建立适宜的SSR反应体系,对影响SSR-PCR扩增的模板DNA浓度、Mg~(2+)的用量、taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等因素进行了优化。
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PCR反应体系中不同模板含量、引物浓度、taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg2+浓度、退火温度和酶切体系中PCR产物量、内切酶量、酶切时间等对反应结果均有不同程度的影响。
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这一实验结果也说明了稀土是一种诱变剂,引起基因突变的机制之一可能是改变taq DNA聚合酶的立体构象,干扰了酶与底物dNTP结合位点,从而引起复制错配。
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